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作者：首都医科大学附属北京地坛医院检验科 刘颖
肺炎支原体的实验室检查是早诊断、早治疗的关键，主要分为一般临床检测、病原学检测和血清学检测，掌握不同检测方法的特点及适用情况，依据不同需求和目的选择不同的检测方法。
一、肺炎支原体感染的临床检测
肺炎支原体感染后，外周血白细胞计数一般正常，后期可轻度升高，重症患者白细胞可＞10×109/L或＜4×109/L。重症肺炎支原体肺炎患者多于发热3天后出现中性粒细胞百分比、C反应蛋白、乳酸脱氢酶、D-二聚体、血清铁蛋白以及一些细胞因子如IL-6、IL-10、IL-17A、IL-18、INF-γ等不同程度升高，与病情严重程度有关，是过强免疫炎症反应的标志。
降钙素原浓度不能用以区分肺炎支原体感染和非肺炎支原体感染。一些重症肺炎支原体肺炎患者可有白蛋白降低。重症肺炎支原体肺炎患者中性粒细胞占比和C反应蛋白明显升高也可能与细菌混合感染有关。
二、肺炎支原体病原学检测
01
培养法
从患者咽喉、鼻咽、胸腔积液或体液中分离培养出肺炎支原体是诊断肺炎支原体感染的“金标准”，并能对分离株进行种属鉴定、分型及药敏试验，特异度接近100%，但敏感度较低，且生长缓慢，通常需要10~14天甚至更长的时间。由于易受抗生素的影响，因此该方法对临床早期诊断的意义很有限，一般不作为临床常规检测。
目前临床常用微生物快速培养（microbial rapid detection，MRD）法，原理为培养与生化反应相结合，肺炎支原体具有分解葡萄糖产酸的能力，使培养液的pH降低，置于恒温箱中培养24 h，根据酸碱指示剂指示的颜色变化判断结果。同时在药敏试验板上包被有10余种抗菌药物，若所测的肺炎支原体对包被的抗菌药物敏感，其酶活性受到抑制，不引起颜色变化；若肺炎支原体菌株对抗菌药物耐药，则可继续生长，从而引起培养基颜色的改变。
02
肺炎支原体的直接免疫荧光（DFA）检测
采用免疫荧光技术，取患者呼吸道拭子或吸取物，检测肺炎支原体抗原。如感染肺炎支原体，则抗原与标记荧光素的抗体结合，在荧光显微镜下可观测到被特异性荧光标记的肺炎支原体活跃性或细胞内显示苹果绿荧光。
此类方法方便快捷，特异性高，适用于疾病的早期诊断，但敏感性较低，且易受人为因素干扰，如未取到感染细胞、没有选中合适的视野等。
三、血清学检查
肺炎支原体感染后，人体内会产生针对它的血清抗体，包括IgM、IgA、IgG类抗体，可通过采集静脉血或末梢血来完成肺炎支原体抗体的检查。
IgM抗体一般在初次感染1周内开始升高，2~3周达到高峰，4周时下降，2~3月降至最低。IgM阳性常被作为近期感染的诊断指标。
IgA抗体在肺炎支原体感染早期迅速上升，由IgM型转换产生，7~14天至峰值水平，回落比IgM更早。IgA抗体变化与IgM一致，成人肺炎支原体感染IgA阳性检出率高，儿童IgA检出率较低。
IgG较IgM和IgA出现晚，一般于感染后14天左右出现，浓度峰值一般在感染后的第5周，且可维持较长时间。
1. 颗粒凝集法（PA）
是实验室测定血清肺炎支原体抗体的主要方法，基本原理是肺炎支原体细胞膜致敏人工明胶颗粒可与待测血清中存在的肺炎支原体抗体成分结合，从而产生凝集反应。
检测的是IgM和IgG的混合抗体，抗体滴度检测范围为1:40~1:10240，单份血清抗体滴度≥1:160可以作为近期肺炎支原体感染的诊断标准。急性期和恢复期（一般间隔2周）抗体滴度呈4倍或以上变化，可确诊肺炎支原体感染。
此方法特异性强、重复性好、操作简单快速，非特异性反应小，是临床检测肺炎支原体感染的常用方法。
2. 免疫胶体金法（GIGT）
应用抗原抗体特异性结合的免疫反应，定性检测肺炎支原体抗体，适合门急诊患者的快速筛查。
基本原理是反应板上肺炎支原体抗原可与待测样本中的肺炎支原体抗体结合，再与胶体金标记的抗人IgM抗体结合并显色，形成肉眼可见的红色斑点或条带。阳性提示肺炎支原体感染，阴性也不能完全排除肺炎支原体感染，假阴性率较高，但也可出现假阳性。因此判定抗体检测结果务必结合临床和影像学特征做综合分析。
此方法操作简单、快速，无需设备，结果稳定易于观察。
3. 酶联免疫吸附试验（ELISA）
基本原理是吸附于载体表面的抗原可以与待测血清中相应的抗体结合，形成抗原-抗体复合物，再与特殊酶标记的第二抗体发生特异性结合，形成的底物复合物在酶的作用下出现颜色反应，颜色的深浅与待测血清中的抗体量成正比，并可通过ELISA检测仪进行定量测定。可分别检测IgM、IgG，单次测定IgM阳性对诊断肺炎支原体的近期感染有价值，但感染早期可能存在假阴性。急性期和恢复期抗体滴度呈4倍或以上变化，可确诊肺炎支原体感染。
4. 间接免疫荧光试验（IFA）
主要检测肺炎支原体IgM抗体，基本原理是用待测标本血清和肺炎支原体抗原相互作用，经温育后洗涤。若待测标本中含有相应抗体，则与抗原发生特异性结合且不会被洗掉，与标记有荧光素的抗人免疫球蛋白抗体结合，在荧光显微镜下可观察到绿色荧光。
该犯法特异性和敏感性较好，具有对照明显、结果判读和操作简单等优点，但易受人为判断荧光结果影响，体内若含有类风湿因子、多种自身免疫性抗体等可产生交叉反应，出现假阳性。
5. 冷凝集试验（CA）
属于非特异性诊断，肺炎支原体感染时的阳性率约50%，流感病毒、腺病毒、巨细胞病毒、EB病毒等感染也可诱导血清冷凝集素的产生，特异性较差，已逐渐被取代。
血清学检测是目前国内外最常用的肺炎支原体感染诊断方法，在肺炎支原体感染的诊断中起到非常重要的作用。与病原学检测方法比较，抗体检测结果不受抗生素治疗的影响，但抗体产生有时间窗和个体差异，在免疫功能不完善或低下、产生抗体能力较低的患者，可能出现假阴性或低滴度抗体，因此需结合病程、年龄、临床表现或影像学综合分析考虑。
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