Zhao Y, Wang H, Wang Y, Jiang Y, Hu X, Shao Z.Integrative multi-omic analysis identified ERBB2 mutations and senescencedriven immune suppression as dual therapeutic targets in LAR triple-negativebreast cancer. Cancer Biol Med. 2026; 23: 374-391. doi: 10.20892/j.issn.2095-3941.2025.0691

三阴性乳腺癌长期以来被当作一种“同质化”疾病治疗，但事实上它包含多个分子亚型。其中LAR亚型尤为特殊：患者多为绝经后女性，肿瘤Ki-67指数很低，呈现“惰性”表型，但淋巴结转移率却高达54%，且对标准新辅助化疗和免疫检查点抑制剂响应甚微。这种“表里不一”的特性提示，LAR亚型背后隐藏着独特的驱动机制。

本研究依托复旦大学附属肿瘤医院FUSCC-TNBC队列（81例LAR vs. 279例非LAR），通过全外显子测序、转录组测序及系统的功能实验，最终锁定两大治疗靶点。

研究流程图

1. LAR亚型中ERBB2突变富集，提示新的精准治疗入口

多组学分析显示，LAR亚型中PIK3CA、PTEN及ERBB2突变显著富集，其中ERBB2突变几乎特异性出现在LAR亚型中（约9%），而在非LAR亚型中基本缺失。与经典HER2扩增型乳腺癌不同，这类突变多位于激酶结构域，属于非扩增型驱动事件。

进一步功能实验表明，这些ERBB2突变并非“旁观者”，这些激活突变在LAR型肿瘤的恶性进展中发挥了关键的驱动作用，通过激活HER2-PI3K-AKT及MAPK等信号通路，促进细胞增殖和克隆形成能力。同时，不同突变位点对靶向药物呈现差异化敏感性。例如，V777L及E698_P699delinsA突变对奈拉替尼高度敏感，而L755S则表现为对拉帕替尼耐药。

LAR相关ERBB2突变的功能验证及靶向治疗
（A）Western blot分析稳定表达空载体（EV）、野生型（WT）或ERBB2突变的MDA-MB-453和MCF-10A细胞系中HER2-PI3K-AKT通路的激活情况。
（B）表达EV、WT ERBB2或ERBB2突变的MDA-MB-453细胞集落形成实验的代表性图像，评估其致癌转化潜能。
（C）定量分析集落形成数的柱状图。数据来自三次独立实验，以均值±SD表示。
（D）携带不同ERBB2构建体的MCF-10A细胞在三维（3D）球体培养中的代表性图像，细胞经溶媒（DMSO）或一组HER2酪氨酸激酶抑制剂（TKI）（拉帕替尼、奈拉替尼、阿法替尼、吡咯替尼）处理。
（E）TKI处理下3D球体培养的相对细胞活力热图。EV：空载体；WT：野生型；TKI：酪氨酸激酶抑制剂。

这一结果具有重要的临床意义：在传统定义为HER2阴性的TNBC中，通过检测ERBB2突变，可识别一部分潜在受益于HER2-TKI靶向治疗的患者，补充了传统病理分型的局限，为精准治疗提供新的入口。

2. LAR亚型中衰老相关免疫抑制是免疫治疗低效的关键原因

除基因突变外，研究团队进一步揭示LAR亚型具有显著的细胞衰老特征。转录组分析显示，该亚型显著富集细胞衰老相关通路，并伴随多种SASP因子（如IL-6、IL-8等）上调，GSEA和ssGSEA均显示，LAR型肿瘤的固有的雄激素受体响应和脂质代谢活跃，其细胞衰老等通路活性显著高于非LAR型。

转录组分析揭示LAR亚型具有独特的细胞衰老特征
（A、B）LAR亚型与非LAR亚型相比，代表性标志性通路的GSEA富集图：（A）上调通路；（B）下调通路。显著通路的判定基于FDR q< 0.25。
（C）SASP基因的表达分析。左图：热图展示SASP基因在LAR和非LAR样本中的归一化表达水平；右图：气泡图展示每个SASP基因的log2FC。差异表达基因（DEG）的定义标准为 |log2FC| > 1 且 FDR校正后P < 0.05。
（D–G）箱线图比较LAR与非LAR亚型之间衰老相关基因集的ssGSEA富集分数：（D）GO BP：细胞衰老；（E）WikiPathways：细胞衰老；（F）Reactome：细胞衰老；（G）GO BP：细胞衰老的负向调控（均来自MSigDB）。

进一步免疫浸润分析显示，LAR亚型呈现典型“免疫冷”表型：CD8⁺ T细胞、NK细胞等效应细胞显著减少。在I-SPY2免疫治疗队列中，衰老特征较高的患者病理完全缓解（pCR）率更低，提示衰老驱动的免疫抑制是免疫治疗耐药的重要机制。进一步分析发现，衰老相关基因特征与T细胞活化、IFN-γ信号等免疫通路呈负相关。

基于上述机制，研究进一步提出一个关键假设：如果解除衰老状态，是否可以恢复免疫治疗敏感性？在患者源性类器官（PDO）模型中，使用衰老调节剂逆转衰老状态，可显著抑制LAR肿瘤生长；在小鼠模型中，单独使用抗PD-1或衰老调节药物效果有限，但联合治疗可显著抑制肿瘤生长，效果明显优于单药。从机制上看，这一策略可降低SASP相关炎症信号，减少免疫抑制细胞，并恢复CD8⁺ T细胞浸润，从而将“免疫冷肿瘤”转化为“免疫热肿瘤”。

LAR-S特征与免疫抑制表型相关，并提示对抗PD-1疗法的敏感性
（A）基于CIBERSORT、EPIC、MCP和TIMER算法，比较FUSCC-TNBC队列中LAR与非LAR亚型之间肿瘤微环境中免疫细胞浸润的相对丰度。
（B）I-SPY 2队列中， pCR组与非pCR组患者LAR-S评分比较。
（C）I-SPY 2队列中，按pCR与非pCR分层的衰老相关特征ssGSEA评分。
（D）pCR患者组中LAR-S评分与免疫通路特征之间的相关系数。
（E）药物处理后第7天PDO的代表性图像。

（F）LAR型PDO经衰老抑制剂治疗后的治疗反应，以相对细胞活力表示。
（G）LAR移植瘤的终点瘤重，治疗包括溶媒对照、NMN、PD-1抗体或联合治疗。
（H）小鼠LAR移植瘤的肿瘤生长曲线。
（I）小鼠LAR移植瘤的代表性肿瘤图像。

对于无ERBB2突变的LAR患者，NMN（已作为膳食补充剂在人体中开展研究）联合免疫检查点抑制剂，提供了一种“老药新用”+“免疫增敏”的可行方案，为该类患者提供了新型精准治疗策略。

本研究通过多组学整合和系统功能验证，本研究立足于临床难治性LAR型三阴性乳腺癌，通过多组学分析与体内外实验，明确了该亚型在基因组突变和免疫微环境层面的两大核心特征，并在此基础上识别出两大治疗突破口：

ERBB2突变亚群：约9%的LAR患者携带可靶向的激酶域突变，对奈拉替尼等TKI敏感，ERBB2突变为部分患者提供了可直接应用的精准靶向治疗路径，提示在HER2阴性人群中开展突变筛查具有现实意义。

衰老驱动的免疫抑制亚群：研究首次将“细胞衰老”作为LAR亚型的核心生物学特征，揭示其通过SASP介导免疫抑制，从而导致免疫治疗低效。联合使用衰老调节剂NMN与PD-1抗体，可在临床前模型中显著逆转免疫抑制、协同抑制肿瘤生长。

整体而言，该研究丰富了三阴性乳腺癌精准分型与治疗的理论基础，从机制到干预策略建立了完整的转化链条，为LAR型TNBC这一难治亚型提供了新的治疗方向，这一“双靶点、双策略”的精准分层治疗思路，有望改善LAR型TNBC患者的长期生存，并为其他衰老相关实体瘤的治疗提供借鉴。

邵志敏 教授

复旦大学附属肿瘤医院

胡欣 教授

复旦大学附属肿瘤医院