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不同病原体，不同脑脊液检测方法

2023-09-07作者：论坛报木易资讯

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本文作者：复旦大学附属华山医院感染科孙钰涵金嘉琳

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阅读要点

病原学诊断在中枢神经系统感染的诊断中至关重要。明确病原体有助于针对性治疗，而早期诊断可以显著改善预后。临床上常用的脑脊液病原学检测方法包括培养法、免疫学检测、PCR技术、二代测序技术等。不同方法有其优势和局限性，临床医生需要根据具体情况选择适当的检测方法来实现准确的病原体诊断。

病原学诊断是中枢神经系统感染诊断的关键一环，明确病原体才能精准治疗，早期诊断有助于尽早开始针对性治疗，可以显著改善预后。临床常用脑脊液病原学检测方法如下。

培养法

优势：可以确定感染的具体病原菌种类，并行体外药敏实验。

局限性：需要较长的培养时间（数天至数周），且对于难以培养的病原菌或病毒不适用。尽管培养法速度较慢，难以满足临床需要，但目前仍是病原检测金标准。

免疫学检测

通过检测脑脊液中的抗体或抗原来诊断感染的病原。

优势：可用于一些病原体无法检测或直接检测困难的情况，如病毒抗体、寄生虫抗体、脑脊液14-3-3蛋白（常见于CJD）、快速血浆反应素环状卡片实验(即RPR，阳性可以诊断神经梅毒)、隐球菌乳胶凝集实验等。

局限性：免疫学检测可以用于检测病原体感染的免疫反应，由于免疫反应需要一定的时间，故不适用于感染极早期。

数字PCR技术

PCR技术发展至今已至第三代，经历了定性PCR技术、定量PCR技术（qPCR）与数字PCR技术（dPCR）三个阶段。实时荧光定量PCR（如Xpert MTB/RIF）是利用一系列已知浓度的标准品制作标准曲线，相同的条件下进行标准品和目的基因扩增，是一种相对定量技术。

数字PCR是基于传统PCR、实时荧光定量PCR基础上发展起来的第3代PCR技术，基本原理是将模板分子稀释并平均分配到几万或几十万个独立反应单元中，进行PCR扩增，通过PCR终点信号“有或无”来实现不依赖于标准品和标准曲线的单分子绝对定量。

优势：相对于荧光PCR技术（第二代PCR），dPCR具有高灵敏度（可实现单分子级检测）、定量准确（不依赖标准物质与标准曲线，绝对定量）、高稳定性（终点PCR，荧光信号在反应结束时读取，不易受到PCR抑制剂的影响）的特点。

二代测序技术

包括宏基因组二代测序（metagenomic next-generation sequencing, mNGS）和靶向二代测序（targeted next-generation Sequencing, tNGS）。

mNGS技术无需事先分离或培养病原体，通过一次测定就能在标本中发现一种或多种病原体，可以帮助诊断传统微生物学技术遗漏的病原微生物。还可以同时检测携带的耐药基因，指导药物选择和治疗策略。

这是一种高通量检测方法，尽管需要复杂的数据分析，成本较高，近年来在病原体检测中的应用越来越受关注，尤其是在罕见致病原及无法培养的病原体鉴定方面有很大优势。需要注意的是，在结果解读方面需要一定的专业知识，并结合临床。

tNGS技术将病原靶向测序,通过超多重PCR扩增与高通量测序两种技术的结合，能够对待测样本中几十至上百种已知病原微生物及其毒力和/或耐药基因进行检测。与病原宏基因组测序（mNGS）相比，tNGS具有病原谱范围明确、检测精度高、测序成本低等优势，病原体设定范围明确，显著简化解读流程，并可同时兼顾DNA和RNA流程，性价比比较高。

总结与反思