EIA：酶免疫分析（Enzyme immunoassay）

GDH：谷氨酸脱氢酶（Glutamate dehydrogenase）

MLST：多位点序列分型（Multi-locus sequencing typing）

NAAT：核酸扩增检测（Nucleic acid amplification testing）

TCD：产毒艰难梭菌（Toxigenic Clostridium difficile）

RT：核糖体分型（Ribo-typing）

4  诊断依据

4.1  危险因素

使用抗菌药物、住院史、老年（大于65岁）、使用质子泵抑制剂、化疗、患有慢性肾脏疾病、管饲或其他免疫功能缺陷等。

4.2  临床表现

症状可由单一腹泻到发热、腹痛、腹胀、恶心和呕吐等全身性感染症状，重症患者出现伪膜性肠炎，严重的并发症有中毒性巨结肠、肠梗阻、肠穿孔和休克等。分为轻中度、重度和重度伴并发症：a）轻中度：腹泻无全身感染表现（白细胞计数<15×109/L，血肌酐<基线1.5倍）；b）重度：腹泻合并全身感染表现（白细胞计数≥15×109/L，血肌酐≥基线1.5倍），出现伪膜性肠炎；c）重度伴并发症：腹泻合并全身性感染症状，同时出现并发症包括中毒性巨结肠、低血压或肠梗阻。

4.3  内镜检查

下消化道内镜检查提示伪膜性肠炎，主要表现为直肠和乙状结肠黏膜表面多发性、隆起的灰绿色或黄褐色斑片。

4.4  实验室检查

4.4.1  生物安全要求

根据原卫生部《人间传染的病原微生物名录》（卫科教发［2006］15号），艰难梭菌的危害程度属于第三类，涉及样本检测和活菌的实验操作在BSL-2级实验室中进行，采用B类（UN3373）包装运输。

4.4.2  粪便样本采集、运输

患者在干燥清洁便盆内自然排便（避免使用坐式或蹲式马桶），用无菌采便管/盒挑取粪便中异常的部分（有黏液、脓液或血液的部分）4 g~6 g；液体粪便≥5 ml。采集的样本需尽快送检培养；4 ℃保存，24 h内完成免疫学检测。

4.4.3  样本的快速检测

腹泻样本无须培养，可直接采用商品化的试剂盒对样本中的谷氨酸脱氢酶（GDH）抗原和毒素A/B同时进行检测，如果二者结果不一致，需结合PCR检测tcdB基因，判断样本中有无产毒艰难梭菌。结果判读：a）GDH+/毒素+：样本中存在产毒艰难梭菌；b）GDH+/毒素-：PCR检测tcdB基因，tcdB+则样本中存在产毒艰难梭菌，tcdB-则样本中无产毒艰难梭菌；c）GDH-/毒素+：PCR检测tcdB基因，tcdB+则样本中存在产毒艰难梭菌，tcdB-则样本中无产毒艰难梭菌；d）GDH-/毒素-：样本中无艰难梭菌。

4.4.4  样本的核酸检测

疑似CDI的腹泻样本，无须培养，提取样本DNA进行艰难梭菌特异的细胞毒素基因tcdB 核酸片段检测，如果阳性，说明样本中存在产毒艰难梭菌。详细的试验流程参见附录A。或采用商品化的试剂盒进行tcdB 基因的荧光定量PCR检测。

4.4.5  细胞毒性试验 （CCTA）

将不成形粪便样本，1 500 g离心5 min~10 min，上清液经0.45 μm滤膜过滤，将粪便滤液与Vero细胞共孵育，分别加入抗A和抗B毒素的中和抗体，同时设置阴性对照组（即不加入抗体），37 ℃ 5% CO培养，24 h、48 h显微镜下观察细胞病变效应（CPE），加入特异性抗体的能阻止该细胞病变，说明样本中存在产毒艰难梭菌。

4.4.6  样本中艰难梭菌的分离培养鉴定

腹泻样本中分离培养鉴定获得产毒艰难梭菌。详细的试验操作规范见附录B。

4.4.7  高毒株RT027型和RT078型艰难梭菌的鉴定

高毒株RT027型是引起全球暴发感染的重要型别，具有较高致死率和氟喹诺酮耐药的特征；RT078型是近年来被广泛报道的型别，主要来源于养殖经济类动物，与社区获得性艰难梭菌感染相关。样本中分离获得的艰难梭菌毒素A、B以及二元毒素（CDT）均阳性，MLST分别为ST1和ST11，RT分别为027型和078型。详细的试验操作流程见附录C。

5  诊断原则

根据危险因素、临床表现、内镜检查和实验室检查进行诊断。注：2岁以下婴幼儿出现腹泻，不推荐进行艰难梭菌感染的相关检查。

6  诊断

6.1  临床诊断病例

符合4.1和4.2的病例。注：排除有腹泻症状的其他常见肠道疾病，如肠易激综合征、炎症性肠病等。

6.2  确诊病例符合临床诊断病例，同时4.3和4.4.3~4.4.7任一结果阳性的病例。

7  鉴别诊断

艰难梭菌感染应与细菌性痢疾、肠侵袭性大肠埃希菌腹泻、沙门菌腹泻、轮状病毒腹泻和诺如病毒感染腹泻等相鉴别。