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幽门螺杆菌(Hp) 是目前所知的能够在人类胃中生存的唯一微生物种类,与慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌等多种消化道疾病密切相关。而且其感染率也是相当之高!资料显示,发展中国家该细菌的感染率为50.8%,发达国家为34.7%,我国自然人群Hp平均感染率高达54.76%。
对检验科来说,Hp可谓是“老朋友”了,大家一直在跟这个狡猾的敌人斗智斗勇。但截至目前,还没有一种诊断方法能成为诊断Hp感染的金标准。而且,在很多时候还会出现假阴性或假阳性。
今天我们就来总结一下Hp检测过程中需要警惕的几种情况。
UBT中的假阴性和假阳性
尿素呼气试验(UBT)中的假阴性和假阳性:
UBT利用Hp的尿素酶活性,将尿素分解为氨及二氧化碳。患者服用经标记的13C或14C的尿素胶囊,通过高灵敏度特定仪器测定呼出的 13CO2 或 14CO2 来判断有无 Hp 感染。
UBT的检测结果会受到一些因素的影响而呈现假阴性或假阳性,其中药物因素较常见。如:胃病患者常服用的质子泵抑制剂(PPI)和H2受体阻滞剂(H2RA)药物,通过抑制胃酸分泌改变胃内酸性环境来减少Hp,但抑酸过度会增加其他产尿素酶细菌,导致出现假阳性结果;此外,PPI还可以直接抑制Hp生长,使细菌定值数低于 UBT 检测的临界值导致假阴性结果出现。
多种抗生素也可抑制Hp菌株的生长繁殖,同时导致Hp球形变,使得UBT结果出现假阴性。检查前同种抗生素的不同用药时长对UBT结果也有明确影响。所以,对于服用上述药物的患者,一般需要停药一个月后再进行UBT检测,以避免出现假阴性或假阳性结果。
此外,胃肠道动力或结构的异常可通过改变胃内酸碱度影响UBT结果。例如胆汁反流破坏胃黏膜屏障而降低UBT的阳性率;胃部分切除的患者因尿素胶囊在胃内停留时间短,尿素酶未完全分解而造成假阴性结果;相反,幽门梗阻患者则可能出现假阳性结果。
做UBT要注意叮嘱患者在试验前15min内严禁剧烈活动,防止血液中的pH酸碱度出现变化;告知患者试验前要漱口,防止口腔分泌物携带细菌,污染集气卡,从而干扰结果的精确性。
PCR检测中的假阴性和假阳性
聚合酶链式反应(PCR)检测中的假阴性和假阳性:
PCR不仅用于细菌检测,还可以用于广谱感染检测、新发感染评估、细菌基因型鉴定、抗生素耐药性和流行病学研究。PCR检测幽门螺杆菌具有简单、准确、快速、自动化、高效的优点。
PCR检测方法不依赖于形态识别,所以不会因使用了PPI、铋剂等药物导致菌体变形而不易观察,不存在个体偏倚。
对于假阳性的结果,通常是源于检测到非幽门螺杆菌与Hp存在基因共享。假阴性则多是源于低细菌计数和存在PCR抑制剂。
解决这个PCR抑制剂,最简单的方法就是研磨组织释放细菌后,在100℃的裂解液中煮沸或使用专用提取试剂盒进行剔除PCR抑制剂,后者效果优于简单煮沸。
组织切片染色镜检的假阴性及假阳性
组织学检查被认为是直接诊断胃黏膜Hp的最佳标准。
组织学诊断幽门螺杆菌的敏感性和特异性高于UBT和RUT。这种检测方法除可直接观察到棒状、球形的菌体外,还可以提供关于不同类型胃炎、萎缩、异型增生、化生和恶性肿瘤等基本数据。
目前组织切片检测Hp较常用的方法包括:Giemsa染色、H&E染色、W-S染色和免疫组化染色。
但在H&E染色中,菌体和背景均呈蓝紫色,肉眼难以区分,可能因观察者经验不足造成假阴性结果;W-S染色通过银染颗粒附着在菌体上呈棕黑色,背景呈棕褐色,较易区分,敏感度也较高,但常因银染颗粒太多,与菌体混在一起,造成假阳性结果。
文章首发自检验速递
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