壹生资讯-【癫痫进阶②】癫痫手术标本该如何进行规范化处理

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【癫痫进阶②】癫痫手术标本该如何进行规范化处理

2023-10-24作者：论坛报沐雨资讯

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作者：首都医科大学宣武医院付永娟朴月善卢德宏

作为癫痫相关研究的宝贵物质基础，癫痫手术标本处理的好坏，会直接影响组织成分的固定和提取质量，影响病理分析过程和形态学观察，甚至影响最终的病理诊断，因此癫痫手术标本的规范化处理是癫痫诊疗和科研质量的根本保障，必须高度重视和强调标本处置的规范性。

2016年ILAE诊断委员会神经病理学专题组发布了有关癫痫手术脑组织的神经病理学检查的国际建议，为脑组织标本的检查制定标准操作程序，最大限度地提供组织形态功能的相关性和后期分子研究的机会。

我们结合该建议以及多年的癫痫外科病理诊断实践，制定了兼顾病理组织学诊断及分子机制研究需求的规范化、多样化取材流程，并由中华医学会神经病学分会神经病理学组和病理学分会脑神经病理学组联合推荐为指南，于2021年发表于《中华病理学》杂志。以下将对该指南的内容进行摘要和介绍。

癫痫手术标本的取材相对于其他神经外科手术标本的取材而言有其特殊性。

难治性癫痫的手术是针对神经电生理功能异常区域进行的手术，而组织病理学分型中发育畸形病变占比很高，这部分病变大多在影像和大体观察上很难发现明确的病灶。因此病理取材医生对于神经解剖的掌握程度直接决定了取材的质量高低。同时，神经外科与病理科的沟通与合作尤为重要，神经外科医生对手术部位及标本方位的详细标记会给病理医生的取材提供重要的线索和依据。

另一方面，在癫痫的病理中常常出现合并性病变，比如2011年国际抗癫痫联盟（ILAE）提出的FCD Ⅲ型即为伴发于各种不同性质病变（如海马硬化，肿瘤及血管畸形等）的皮质发育不良。因此，癫痫标本的取材更加强调完整性，要求能够最大限度地展示病变的全貌，大标本(即整片标本)的取材和制作成为癫痫病理的必需。

在保证病理诊断的前提下，为了能够进行深入的发病机制研究和探讨，多样化取材是该流程的另一个关键点。

下面详细介绍脑组织标本的处理及取材流程。

一、

标本的标记和运送

癫痫外科在手术中切除脑组织后，应该用稍微潮湿的生理盐水纱布覆盖标本，或将标本放入专门的平皿中，做好标识，如标本的定位、异常放电集中区域等，并立即与病理科联系。标本运送时应置于冰桶中，并保证标本的完整性，任何人不应随意切开标本或私自切取标本。

二、

标本的处理及取材流程

病理医师收到标本后，首先要对病人的基本信息进行核对，准确无误后再对标本进行编号和登记，然后按照以下程序处理标本。

将新鲜标本编病理号并进行大体观察和拍照。在整个标本的处理过程中，应该强调标本肉眼观察的重要，应当由表及里仔细观察脑表面的血管、脑膜厚薄、有无渗出物、脑组织的质地、颜色，以及脑回的大小、灰质厚薄及皮白质分界是否清晰等，准确测量标本及病变区域大小，并做好详细的记录。拍照要求背景干净，标尺清楚，编号正确，标本摆放有序，标本表面干净、无血渍、水渍，光源充足，对焦清晰，尽量保证照片的高质量。

将新鲜标本沿冠状切面，每间隔5mm左右逐一切开标本。脑叶标本要求垂直于皮质，以保证在切片上清晰地显示皮质的层状结构，这是评判皮质发育畸形尤其是FCD等病变的必备条件。海马标本要求垂直于长轴或侧脑室壁，以便观察海马结构的CA1-CA4区段以及齿状回颗粒细胞层，这是判断海马硬化及其分型的前提。如标本方位难以辨认时需及时跟手术医生沟通确认。

将切开的脑大体切片按顺序排列整齐，进行大体的观察、拍照及记录，并于每一切片的背面进行编号的标记。

选取部分新鲜组织，置于-80℃冰箱冻存。

如果标本充足，选取部分病变组织用OCT包埋后放于-80℃冰箱冻存。

将其余的脑切片整片放入10%磷酸盐缓冲福尔马林固定液中固定2天左右。

选取固定后的需做石蜡切片的脑组织切片整片放入70%乙醇液中脱水脱脂24小时。

脱水脱脂后的脑组织放入自动脱水机中，按照设定的程序进行脱水、透明、浸蜡。

石蜡包埋、切片、染色、封片。切片厚度的要求为LFB髓鞘染色是8微米，HE及免疫组化染色是4微米。

对于癫痫病理诊断来说大切片石蜡制片技术具有绝对的优势。与传统的常规石蜡制片技术相比，大切片石蜡制片技术可以使我们能够充分利用脑标本，而不必拘泥于取材盒的大小，将脑组织切片整体取材、整体制片。这种方法能够很好地将大体观察和组织形态学观察结合起来，完整地观察病变区以及病变与周围组织之间的移行和过渡，并有利于评价周围皮质的发育不良情况，因此更适于癫痫脑标本的组织学诊断。

三、

辅助检查套餐的选择

癫痫的外科病理学涉及多种性质的病变，包括发育畸形、肿瘤、缺氧、外伤、感染以及血管异常等等。因此，需要根据常规HE染色切片的观察进行初步判读，然后具有针对性地选择组织化学染色、免疫组化染色甚至分子遗传学检测。

其中，针对神经元、星形胶质细胞及少突胶质细胞的标记物以及髓鞘染色是必备的。其他免疫组化抗体则是根据各病例的病变性质来选择，如FCDⅡ型及结节性硬化（TSC）病例需要加染识别形态异常神经元（dysmorphic neurons）和气球细胞(balloon cells)等异常细胞成分的抗体。而肿瘤性病变则需要CD34及BRAF V600E等的辅助诊断，并需要Ki67染色来判定肿瘤细胞的增殖潜能。各种病因病理所对应的染色项目的选择请参照表1。

表1 癫痫外科手术切除脑组织形态学诊断的病因别辅助检查（点击放大）

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