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艰难梭菌感染（CDI）临床症状最早可出现在开始用药后数小时至2 d之内，最晚可于停药后3周内出现。症状可由单一腹泻到中、重度感染包括发热、腹痛、腹胀，腹泻初期为水样便，常多于3次/24 h，后期可发展为脓血便。重症患者白细胞增多。严重感染表现为水样便伴有脱水、中毒性结肠炎和脓毒血症，粪便中可有黏膜状物存在。

CDI诊断标准为:患者出现中至重度腹泻或肠梗阻，并满足以下任一条件:(1)粪便检测CD毒素或产毒素CD结果阳性；(2)内镜下或组织病理检查显示伪膜性肠炎

病原学检查

1.粪便标本采集

一般情况下，仅需对稀便、水样便或半成形便进行CD检测。对于疑似有CD感染及肠梗阻的患者，应通过直肠拭子进行检测。在出现明显腹泻症状(≥3次/24 h、持续超过2 d)及进行针对性治疗前，采集不成形粪便标本( 推荐10～20 ml，不少于5 ml)送检。CD毒素室温下易降解，应于取材后2 h内送检并立即检测；如不能立即检测，则需将标本置于4 ℃冰箱保存，不超过3 d。

2.艰难梭菌菌株检测

(1)培养

常采用CCFA 培养基(cefoxitin cycloserine fructose agar，CCFA) 或CD显色培养基进行厌氧培养。CCFA培养基需培养48 ～ 72 h，对粪便标本通过加热或乙醇预处理可以减少粪便正常菌群，筛选出细菌芽孢。厌氧培养敏感度较高，但不能区分菌株是否产生毒素，可作为难辨梭菌筛查的有效方法之一，菌株可用于流行病学调查。

(2)谷氨酸脱氢酶检测

谷氨酸脱氢酶( glutamate dehydrogenase，GDH)是所有CD高水平表达的代谢酶，可用于筛查疑似CDI患者粪便样本中是否存在CD。该方法可作为一种高度敏感的初筛试验，GDH试验阴性，可直接报告临床用于排除CDI；GDH试验阳性，需要进一步检测其毒素或毒素基因进行确证。

3.艰难梭菌毒素检测

(1)细胞毒性试验

细胞毒性试验(cell cytotoxicity assay，CCTA)，即细胞毒性中和试验(cell cytotoxin neutralization assay，CCNA)，用于直接检测粪便标本中存在的CD毒素。CCTA是实验室诊断CD的金标准，特异性强，敏感度高(最低可检测出10 pg毒素)，但需要细胞培养及显微镜观察的相应设施和技术，操作烦琐，耗时长(48 ～72 h)，判定结果需要一定经验的技术人员，不适宜临床常规检测。

(2)产毒素培养

产毒素培养(toxigenic culture，TC)用于检测CD菌株的产毒素能力。TC是实验室诊断CD的参考方法，敏感度高，特异性强，但操作烦琐，耗时长(5 d左右)，结果判读的技术人员需要有一定经验，不适宜临床常规检测，可用于流行病学监测，并作为评价其他检测方法的参考标准。

(3) 毒素免疫检测

目前常用EIA 直接检测腹泻粪便标本中的CD 毒素，用单克隆抗体特异性结合CD A/B 毒素蛋白进行检测。EIA检测CD 毒素的优点是特异性高( ＞ 90%) ，能区分产毒株和非产毒株，并且检测周期短，数小时即可出结果，操作简便，应用广泛；缺点是敏感度较低(39% ～ 76%)，不能单独用于CD 感染的实验室诊断。

4.艰难梭菌毒素基因检测

可采用实时PCR或环介导等温扩增法(loop-mediated isothermal amplification，LAMP)等分子生物学技术，定性检测粪便样本中的CD毒素基因。核酸扩增技术（NAAT）具有高敏感度和特异性，该方法可作为唯一的独立测试技术检测产毒素CD，且检测时间短，能够及时隔离和治疗CDI患者，从而减少院内传播的机会，并改善患者预后。

5.推荐实验室诊断流程

不同的诊断方法各有优缺点，见表1。综合考虑不同方法的敏感度、特异性、耗时、费用等因素，推荐使用两步法或三步法进行CDI诊断。

(1)三步法:即首先使用GDH试验初筛，GDH阳性进行毒素EIA试验，二者结果不一致使用CCTA、TC 或NAAT确证(图1)。

(2)两步法：即同步联合检测GDH和毒素EIA试验，二者结果不一致使用CCTA、TC或NAAT确证(图2) 。