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细菌体形小、半透明，经染色后才能观察较清楚。染色法是使染色剂与细菌细胞质结合,最常用的染色剂是盐类。
其中，碱性染色剂(basic stain)由有色的阳离子和无色的阴离子组成，酸性染色剂(acidic stain)则相反。
细菌细胞富含核酸，可以与带正电荷的碱性染色剂结合；酸性染色剂不能使细菌着色，而使背景着色形成反差，故称为负染(negative staining)。
染色法有多种，最常用和最重要的分类鉴别染色法是革兰染色法(Gram staining)。该法是丹麦细菌学家革兰(Hans Christian Gram,1853—1938)于1884年创建,至今仍在广泛应用。
操作方法：
标本经固定后，先用碱性染料结晶紫初染，再加碘液媒染，使之生成结晶紫-碘复合物。此时细菌均染成深紫色。然后用95%乙醇脱色，有些细菌被脱色，有些不能。最后用稀释复红或沙黄复染。
此法可将细菌分为两大类:
革兰阳性菌：不被乙醇脱色仍保留紫色者。
革兰阴性菌：被乙醇脱色后复染成红色者。
革兰染色法的意义：
革兰染色法在鉴别细菌、选择抗菌药物、研究细菌致病性等方面具有重要的意义。
革兰染色法的原理尚未完全阐明。
但与菌细胞壁结构密切相关,如果在结晶紫-碘染色之后,乙醇脱色之前去除革兰阳性菌的细胞壁,革兰阳性菌细胞就能够被脱色。
目前，对革兰阳性和革兰阴性菌细胞壁的化学组分已十分清楚，但对革兰阳性菌细胞壁阻止染料被溶出的原因尚不清楚。
临床常见的致病菌
①革兰阳性球菌
如金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、溶血链球菌、非溶血链球菌、肺炎球菌和肠球菌等
②革兰阴性球菌
如脑膜炎球菌、淋球菌、摩拉卡他菌等
③革兰阴性杆菌
不动杆菌属(鲍曼不动杆菌、洛菲不动杆菌)
假单胞菌属(铜绿假单胞菌和其他假单胞菌)
军团菌属等
④革兰阴性兼性厌氧菌
如肠杆菌科细菌(大肠埃希菌、沙门菌属、志贺菌属、克雷伯菌属、变形杆菌属等)、流感杆菌、弧菌科细菌(霍乱弧菌、El Tor弧菌、副溶血弧菌)等
⑤厌氧菌
脆弱类杆菌、梭形杆菌、消化链球菌、费氏球菌等
⑥形成芽孢的细菌
炭疽杆菌、蜡样杆菌、破伤风杆菌、产气荚膜杆菌、肉毒杆菌、难辨梭菌等
不形成芽胞的细菌有单核细胞增多性李斯特菌、红斑丹毒丝菌等
此外，重要的致病菌还有白喉杆菌、结核杆菌、麻风杆菌等。
首发于离床医学公众号
作者：云南省文山州人民医院 黄江义
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